ICS_13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 203—1999 中毒案件检材中磷胺、久效磷的 定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for phosphamidon and monocrotophos in case samples 1999-03-05发布 1999-07-01实施 中华人民共和国公安部发布 GA/T 203—1999 前 言 本标准的编制任务由公安部刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。本标准 的制定建立在《有机磷农药中毒检验研究》课题成果以及全国部分省市刑事化验人员长期办案的基础 上。本标准适用于中毒及中毒死亡者呕吐物、吃剩的食物、胃吸出液以及胃、肝、肺、血和胃、肠内容物等 的定性及定量分析。 本标准的内容主要为：适用范围、分析方法及操作。包括提取净化方法，TLC、GC分析方法及其评 价等。本标准经过多年办案实践证明，方法操作简便，分析方法准确可靠。 本标准由中华人民共和国公安部提出。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：公安部第二研究所。 本标准主要起草人：赵敬真、徐婉。 中华人民共和国公共安全行业标准 中毒案件检材中磷胺、久效磷的 GA/T 203—1999 定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for phosphamidon and monocrotophos in case samples 1范围 本标准规定了中毒检材中磷胺、久效磷的定性及定量分析方法。 本标准适用于中毒者的呕吐物、吃剩的食物、胃吸出液以及中毒死亡者的胃内容物、胃组织、十二指 肠内容物、血液、肺、肝以及注射部位肌肉和现场收集可疑物证中磷胺、久效磷的定性及定量分析。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GA/T122-1995毒物分析名词术语 3定义 本标准采用GA/T122中的定义。 第一篇 气相色谱法（GC法） 4原理 本方法采用添加标准品进行对照分析的气相色谱法定性、定量分析检材中的农药。即检材与添加到 空白检材中的阳性对照和空白检材的阴性对照，同时经过提取净化及浓缩至一定体积后，用具有火焰光 度检测器或氮磷检测器气相色谱仪进行检测，与标准品比对，以RT值作为定性标准。与平行操作的阳 性对照比较，以峰面积值（或峰高值)为依据，用外标法计算各检材中的药物含量。 5试剂（所用试剂均为分析纯） 5.1氯仿。 5.2二氯甲烷。 5.3丙酮。 5.4乙酸乙酯。 5.5苯。 5.6乙醚。 中华人民共和国公安部1999-03-05批准 1999-07-01实施 1 C. GA/T203—1999 5.7甲醇。 5.8无水乙醇。 5.9无水硫酸钠。 5.10中性层析氧化铝：市售100～200目的中性层析氧化铝，于130℃下活化3h，冷却后按6%比例加 蒸馏水，搅拌均匀后放回瓶内，平衡24h后即可使用。 5.11活性炭，层析用颗粒活性炭（0.43mm或20~40目）。 5.12农药标准溶液 5.12.1＇磷胺、久效磷单一标准储备液：精确称取磷胺、久效磷标准品一定量，分别用无水乙醇配制成 10.00mg/mL的储备液装于棕色瓶中，于冰箱中保存，有效期2a。 5.12.2单一农药标准的溶液：将上述各农药的单一农药储备液分别取1.0mL，装于10mL棕色容量 瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀后即得各农药的1.00mg/mL的单一标准溶液（供提取添加和薄层 色谱法点样使用），使用期0.5a。 5.12.3磷胺、久效磷混合标准液：分别取10.00mg/mL的单一农药标准储备液各1.0mL装于同一 10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，得各含1.00mg/mL的混合农药标准液（供薄层色谱法点样 用或添加提取用），使用期0.5a。 5.12.4单一农药标准使用液：将各农药的1.00mg/mL的单一标准液一定量按5～10倍稀释之后，即 可供气相色谱分析标准用（根据所用仪器条件及灵敏度确定稀释倍数，一般磷胺为0.200mg/mL，久效 磷0.100mg/mL），使用期30d。 5.12.5磷胺、久效磷混合标准使用液：分别取1.00mg/mL的磷胺标准液2.0mL、久效磷标准液 1.0mL装于同一只10mL棕色容量瓶中，加丙酮或无水乙醇稀释至刻度摇匀后，得含磷胺0.200mg/ mL、久效磷0.100mg/mL浓度的混标液，供GC分析标准用（注意根据仪器条件来配制混合溶液的浓 度），使用期30d。 6仪器及器材 6.1带有火焰光度检测器(FPD)或氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪。 6.2气相色谱数据处理机。 6.3多用振荡器。 6.4K·D浓缩器或其他浓缩装置等。 6.5微量注射器：10μL、50μL、100μL。 6.6实验室常用玻璃器材。 7提取净化方法 7.1·操作 7.1.1试样制备 绞碎的胃、肝组织5g，呕吐物、胃内容物1～2g，血5mL分别装于100mL烧杯或蒸发血中，加无 水硫酸钠研成沙状（约加30~40g），分别装于100mL的分液漏斗中。 液体检材10~20mL逐次加硫酸钠或氯化钠使呈饱和状态，装于100mL分液漏斗中。 空白胃组织5g，共2份，其中1份添加磷胺或久效磷100～200μg作为阳性对照，另1份作为阴性 对照。两份试样分别用无水硫酸钠研成沙状，装于100mL的分液漏斗中。 7.1.2提取 各试样用三氯甲烷(二氯甲烷、二氯甲烷一乙酸乙酯（3：1)、二氮甲烷一苯（3：1)或苯等有机溶剂） 50mL提取2次，每次振播15～20min，分出提取液过柱净化。 注；液体样品用硫酸钠制成和溶液后，直接用氯仿或苯提取即可，提取液较干净时可以不用过柱净化。 GA/T 203—1999 7.1.3净化及浓缩 7.1.3.1装柱：取长约30cm、内径1~2cm的玻璃直管柱（也可以用50mL梨形分液漏斗代替），于底 层塞上少许脱脂棉，依次加无水硫酸钠2g、中性层析氧化铝3~5g、活性炭0.2～0.5g、中性层析氧化 铝5~10g，最顶层压5~10g无水硫酸钠，用提取溶剂润湿柱子。 7.1.3.2过柱净化：将各试样的提取液分别倒人各柱上，流速约100滴/min，最后用20mL提取溶剂 淋洗柱子，收集净化液于浓缩器皿瓶中。 7.1.3.3净化液于60℃下浓缩到0.5~1mL，混勾后供分析。 7.2注意事项 7.2.1磷胺、久效磷亲水性较强，如提取效果较差可适当地加人丙酮、乙醇或甲醇提高溶剂的极性。 7.2.2检材如不是生物样品，可以不经过柱净化。 7.2.3中性层析氧化铝和活性炭的用量视检材用量和腐败程度而定。 7.3方法回收率 5g胃组织添加200ug久效磷或磷胺，回收率为78%±4.8%和70%±5.4%。 8定性分析 8.1气相色谱条件（参考值） 8.1.1色谱柱 a）1.5%0V-17+5%DC-200GasChromQ60~80目混涂玻璃填充柱； b）5%QF-1GasChromQ6080目+10%DC-200GasChromQ60~80目（1：1)混装玻璃填充 柱； c）5%OV-210GasChromQ60~80目玻璃填充柱； d）5%QV-17GasChromQ60~80目玻璃填充柱或者OV-17、OV-1、SE-30等石英毛细管柱。 8.1.2其他条件参考值 柱 温：150~210℃； 进样口温：200230℃； 检测器温：220~230C(FPD或NPD)； 高纯氮气：50~65mL/min； 空气和氢气比以仪器最佳配比值。 8.2进样 将各试样（检材、空白添加提取液及标准溶液、空白提取液）吸取1～2μL，注人设定好的气相色谱 仪中，每个样品进样2~3次。 8.3记录 分别记录各试样的保留时间（RT值），求出各试样的RT平均值，与标准品比对进行定性。记录空 白添加及纯品的峰面积（或峰高)的平均值，计算空白添加药物的回收率，评价操作方法的价值。 8.4外标回收率计算公式： 空白检材添加农药的峰面积（峰高）平均值 外标回收率（%）= ×100 等量已知农药的峰面积（峰高）平均值 8.5色谱图 如图1所示。 3 GA/T203—1999 色谱条件 仪器：SP-501N型GC/FPD,C-R3A微处理机 5%OV-17GasChromQ60~80目玻璃填充柱 柱温：150℃（1min）5C/min210C；汽化室：250C；检测器（FPD）；250℃ 1--DDVP1.33min;2—久效磷10.65min;3磷胺13.35min 图1久效磷、磷胺的气相色谱图 8.6最小检出量 如表1所示。 表 1 检测器上最小检出量 药物 NPD FPD 15 ng 40 ng 久效磷 10 ng 50 ng 磷胺 9定量分析 9.1定量分析样品制备 准确称取检材5～10g，各2份；称取相应的空白检材等量，2份，其中1份添加待测定的农药标准 （添加量为定性分析时粗定量数据的1.5倍)作为阳性对照定量试样，另1份作为阴性对照试样。 9.2提取净化同第7章。 9.3色谱分析条件同8.1。 9.4进样同8.2。 9.5记录 记录检材及空白检材添加标准品峰面积（或峰高)值，计算各自的峰面积平均值。 9.6含量计算公式及相对相差计算公式 检材农药峰面积（峰高）值XAX检材体积XV添 药物含量X（μg/g）= 添加农