(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202211179978.X (22)申请日 2022.09.27 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115261321 A (43)申请公布日 2022.11.01 (73)专利权人 北京大学口腔医学院 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 22号 (72)发明人 张学慧　邓旭亮　吕丹　宋佳　 (74)专利代理 机构 北京正元瑞驰知识产权代理 事务所(普通 合伙) 16090 专利代理师 吴琼 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 13/00(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61K 39/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 111172151 A,2020.0 5.19 WO 9734593 A1,19 97.09.25 WO 2005058333 A1,2005.06.30 CN 108384742 A,2018.08.10 VLADIMIR HOLAN 等.Effects of Direct Current on T Cell Activity: Modulati on of Interleuk in-2 Producti on. 《Immunobiol》 .1994,第190卷(第4- 5期),第3 68-375页. VLADIMIR HOLAN 等.Effects of Direct Current on T Cell Activity: Modulati on of Interleuk in-2 Producti on. 《Immunobiol》 .1994,第190卷(第4- 5期),第3 68-375页. 冯吉杰,等.不同强度经皮穴位电刺激对胸 腔镜手术患者 术后免疫功能的影响. 《上海针灸 杂志》 .2020,第39卷(第5期),第584- 588页. 审查员 张维捷 (54)发明名称 增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法及用途 (57)摘要 本发明公开增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方 法及用途。 该方法包括使T淋巴细胞在物理电刺 激条件下进行培养的步骤， 其中， T淋巴细胞包括 初始T细胞或修饰的T淋巴细胞。 本发明的方法不 涉及复杂、 筛选流程长的传统基因编辑手段， 能 够快速有效增强T淋巴细胞抗肿瘤功能， 可用于 促进CAR‑T细胞疗法。 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 CN 115261321 B 2022.12.27 CN 115261321 B 1.一种体外制备功能增强型T淋巴细胞的方法， 其特征在于， 包括使T淋巴细胞在物理 电刺激条件下进行体外培养的步骤， 其中物理电刺激通过铁电活性材料产生， 所述铁电活 性材料具有正电的第一面和具有负电的第二面， 所述具有负电的第二面能够增强T淋巴细 胞功能， 其中所述铁电活性材料包括有机铁电聚合物和无机铁电颗粒， 增强T淋巴细胞功能 包括选自下述至少之一： a. 存活时间更长； b. 增殖性增强； c. 抗肿瘤活性 提高； d. CD25和/或DCFDA 表达升高。 2.根据权利要求1所述的体外制备功能增强型T淋巴细胞的方法， 其特征在于， 所述铁 电活性材 料的压电常数为1 ‑40 pC/N。 3.根据权利要求1所述的体外制备功能增强型T淋巴细胞的方法， 其特征在于， 所述有 机铁电聚合物包括聚酯类、 聚偏氟乙烯、 聚偏氟 ‑三氟乙烯、 聚偏氟乙烯 ‑六氟丙烯、 聚偏氟 乙烯‑四氟乙烯、 聚甲基丙烯酸甲酯和聚二甲基硅氧烷中的至少一种或其组合。 4.根据权利要求2或3所述的体外制备功能增强型T淋巴细胞的方法， 其特征在于， 所述 无机铁电颗粒包括钛酸钡、 钛酸锶钡、 铌酸锂、 铌酸钾钠和羟基磷灰石中的至少一种或其组 合。 5.根据权利要求4所述的体外制备功能增强型T淋巴细胞的方法， 其特征在于， 所述无 机铁电颗粒表面包覆多巴胺层。 6.铁电活性材料在制备专用于增强T淋巴细胞功能的培养基材中的用途， 其特征在于， 其中通过铁电活性材料产生物理电刺激， 所述铁电活性材料具有正电的第一面和具有负电 的第二面， 所述具有负电的第二面能够增强T淋巴细胞功能， 其中所述铁电活性材料包括有 机铁电聚合物和无机 铁电颗粒， 增强T淋巴细胞功能包括选自下述至少之一： a. 存活时间更长； b. 增殖性增强； c. 抗肿瘤活性 提高； d. CD25和/或DCFDA 表达升高。 7.一种功能增强的T淋巴细胞， 其特征在于， 其通过根据权利要求1 ‑5任一项所述的方 法制备得到。 8.根据权利要求7所述的功能增强的T淋巴细胞， 其中， 所述T淋巴细胞包括效应T细胞、 细胞毒性T细胞、 初始T细胞及修饰的T淋巴细胞， 其中所述修饰的T淋巴细胞包括CAR ‑T细 胞。 9.药物组合物， 其特 征在于， 包括权利要求7或8所述的功能增强的T淋巴细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261321 B 2增强T淋巴细胞 抗肿瘤功能的方 法及用途 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体地涉及利用物理电刺激来增强T淋巴细胞抗肿瘤 功能的方法及由此 得到的T淋巴细胞及应用。 背景技术 [0002]随着传染病死亡率的大幅下降， 癌 症已成为威胁人类健康的第二大死因。 并且， 癌 症的发病率呈逐年上升和年轻化趋势。 肿瘤的常规治疗方法包括手术、 放疗、 化疗、 介 入等。 虽然这些方法对于减轻肿瘤负荷见效快， 但是存在治疗不彻底， 对机体毒副作用较大等弊 端。 随着生物技术研究 的进展， 肿瘤免疫疗法在肿瘤治疗中取得重大突破。 肿瘤免疫治疗包 含免疫检查点抑制剂、 过继性细胞疗法以及肿瘤 疫苗等。 嵌合抗原受体(chimeric  antigen  receptor，  CAR)‑T细胞疗法是目前最受关注的过继性细胞治疗， 在 治疗血液系统肿瘤方面 表现出巨大潜力， 尤其在治疗复发或难治性急、 慢性白血病上已取 得突破性进 展。 [0003]CAR‑T细胞疗法的一般流程是： 首先从肿瘤患者体内分离获得T淋巴细胞， 人工合 成CAR， 之后利用病毒载体将设计好的CAR转入T淋巴细胞中， 并进行体外筛选与扩增， 最后 回输到患者体内， 通过CAR ‑T细胞表面表达的抗体特异 性识别肿瘤细胞， 并同时激活下游信 号通路， 从而实现CAR ‑T细胞活化增殖以及对肿瘤细胞特异性杀伤的作用。 相较于传 统T细 胞过继疗法， CAR ‑T细胞不需要M HC分子参与， 能够直接对肿瘤 细胞发挥杀伤作用。 [0004]尽管CAR‑T细胞疗法对于血液系统肿瘤治疗效果显著， 但 是CAR‑T细胞进入受体患 者后存在 存活时间短、 杀伤功能差、 肿瘤微环 境中浸润不 足等问题， 使其疗效受限。 因此， 维 持CAR‑T细胞的体内存活、 优化CAR ‑T结构、 改善肿瘤微环 境状态是提高T细胞靶向肿瘤的精 确性、 增强抗肿瘤效果的关键。 随着研究的深入， 修饰细胞因子、 细胞因子受体、 趋化因子、 趋化因子受体和嵌合激活受体等免疫调节分子的CAR ‑T逐渐开发出来， 从而增强T淋巴细胞 的持久性和杀伤性。 通过基因编辑的方式来改造T淋巴细胞存在耗时长、 效率低等缺点， 基 因片段随机性插入还会涉及生物安全性问题。 改善肿瘤微环境的策略受到肿瘤患者个体差 异的影响， 不具有普遍意 义。 [0005]背景技术中的信息仅仅在于说明本发明的总体背景， 不应视为承认或以任何形 式 暗示这些信息构成本领域 一般技术人员所公知的现有技 术。 发明内容 [0006]为解决现有技术中的技术问题， 尤其是现有利用基因编辑手段增强CAR ‑T细胞疗 法耗时长、 效率低、 筛选流程较长的技术问题， 本发明提供一种增强T淋巴细胞抗肿瘤功能 的方法。 具体地， 本发明包括以下内容。 [0007]本发明的第一方面， 提供一种增强T淋巴细胞功能的方法， 其包括使T淋巴细胞在 物理电刺激条件下进行培 养的步骤。 [0008]在某些实施方案中， 根据本发明所述的增强T淋巴细胞功能的方法， 其中， 所述物 理电刺激通过带电基质 、 导电基质 、 直流电、 交流电、 脉冲电、 磁电或铁电活性材料产生。 此说　明　书 1/8 页 3 CN 115261321 B 3