ICS 65.020.30 B 43 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 1775—2019 广灵驴冷冻精液 2019 - 06 - 25 发布 山西省市场监督管理局 2019 - 08 - 25 实施 发 布 DB14/ T 1775—2019 目 前 次 言 .............................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 要求 ............................................................................... 2 5 抽样 ............................................................................... 2 6 质量检验 ........................................................................... 3 7 结果判定 ........................................................................... 3 8 包装及标识 ......................................................................... 4 附 录 A （规范性附录） 广灵驴冷冻精液质量检验方法 .................................. 5 I DB14/ T 1775—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山西省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山西省畜禽繁育工作站、广灵县优种驴场。 本标准主要起草人：明世清、孙永胜、李树军、贠红梅、刘莉、陈廷珠、赵小凤、张佳楠、李沁、 杨建军、弓瑞娟、张敏、张明娟、邢亚亮。 II DB14/ T 1775—2019 广灵驴冷冻精液 1 范围 本标准规定了广灵驴冷冻精液要求、抽样、质量检验、结果判定和包装及标识。 本标准适用于广灵驴冷冻精液质量鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 2828.2-2008 计数抽样检验程序 第2部分：按极限质量（LQ）检索的孤立批检验抽样方案 GB/T 2828.11-2008 计数抽样检验程序 第11部分：小总体声称质量水平的评定程序 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 GB/T 25245 广灵驴 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 直线前进运动精子数 每剂量精液中呈直线前进运动的精子数。 3.2 精子活力 在 37℃环境下直线前进运动精子占总精子数的百分率。 3.3 精子畸形率 畸形精子占总精子数的百分率。 3.4 细菌数 每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数。 1 DB14/ T 1775—2019 3.5 冷冻精液 将原精液过滤、离心后，用稀释液等温稀释、平衡后超低温快速冷冻，在液氮中（-196℃）保存的 精液。 3.6 广灵驴 符合 GB25245 的品种特征要求。 4 要求 4.1 新鲜精液 从种用价值评价为特等或一等、体质健康、无遗传病的种用广灵驴中采集，色泽乳白色或淡黄色。 8 精子活力≥70%，精子密度≥2×10 个/mL，精子畸形率≤14%。 4.2 每剂量解冻后精液 4.2.1 外观 细管无裂痕，两端封口严密，印制标志清晰，剂量充足。 4.2.2 剂型、剂量 细管冷冻精液，中型，剂量≥0.4 mL/支。 4.2.3 精子活力 精子活力≥30%。 4.2.4 直线前进运动精子数 直线前进运动精子数≥3×107 个。 4.2.5 精子畸形率 精子畸形率≤25%。 4.2.6 细菌数 细菌数≤1000 个。 5 抽样 5.1 抽样检验方案 5.1.1 生产方抽样检验 按照 GB/T 2828.2-2008 中的第 4 章，采用极限质量 LQ=20，模式Ａ一次抽样方案，确定抽样公驴 2 DB14/ T 1775—2019 样本量。 5.1.2 质量监督抽样检验 按照 GB/T 2828.11-2008 中的第 6 章，该群体广灵驴种公驴为一检查总体，采用 DQL=10，选用第 Ｉ检验水平的抽样方案；查 GB/T 2828.11-2008 中表 B.2，确定抽样公驴的样本量。 5.1.3 复检和仲裁抽样检验 复检可根据原抽样方案确定，仲裁应按照 5.1.2 规定的方案进行抽样检验，按照 7.3.2 规定的方案进 行评定。 5.2 抽样方法 随机抽样。 6 质量检验 6.1 外观 用目测法，其结果应符合 4.2.1 的规定。 6.2 剂量 检验按附录 A.2 的方法，结果应符合 4.2.2 的规定。 6.3 解冻后每剂量精液 解冻方法及精子活力、直线前进运动精子数、精子畸形率、细菌数的检验按照附录 A.3——A.6 规 定的方法，其结果应分别符合 4.2.3～4.2.6 的规定。 6.4 检验项目 6.4.1 常规检验 对冻精的单项目检验是型式检验的一部分，主要是在入库前和出库时的检验，结果符合本标准中 4.2.1 和 4.2.3 的规定。 6.4.2 型式检验 对冻精全部项目检验，评定产品质量是否全面符合标准，也是在冷源异常、生产方抽样检验、仲裁 和质量监督抽样验验时选定项的检验，结果符合本标准中 4.2 的规定。 7 结果判定 7.1 常规检验 样品中任何一项目检验未达到 4.2.1 和 4.2.3 的规定要求，则判为不合格。 7.2 型式检验 样品中任何一项目检验未达到 4.2 的规定要求，则判为不合格。 3 DB14/ T 1775—2019 7.3 抽样检验对群体质量水平的评定 7.3.1 生产方抽样检验 生产方抽样检验按照 GB/T 2828.2-2008 中第 4 章的规定，通过对本样本检验，若样本中不合格品 数等于或小于接收数 AC，则接收该批（合格） ，否则不接收该批（不合格）。 7.3.2 质量监督抽样检验 按照 GB/T 2828.11-2008 中规定，在样本中 d（不合格品数）≤L（不合格品限定数)，即抽检样本 符合要求，核查通过；当 d＞L,即抽检样本不符合要求，核查总体不合格。 8 包装及标识 8.1 包装 灭菌纱布袋包装并设外标签，每一包不得超过 100 剂细管，保证装入细管冻精后能自然浸泡在液氮 中。 8.2 标识 在细管壁和纱布袋外标签上印制以下内容，印制标识清楚，并按以下顺序排列： 8.2.1 生产站（场）名； 8.2.2 广灵驴种公驴编号； 8.2.3 生产日期或批次； 8.2.4 冻精数量。 4 DB14/ T 1775—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 广灵驴冷冻精液质量检验方法 A.1 抽样 A.1.1 样品的收集 抽样：从贮存冷冻精液的液氮容器中按规定随机抽取样品。 送样：将抽取的样品送至检测机构。 A.1.2 抽样方案 A.1.2.1 生产方抽样检验 按本标准 5.1.1 确定样本数。 A.1.2.2 质量监督抽样检验 按本标准 5.1.2 确定样本数。 A.1.2.3 抽样方法 按驴号顺序排列，由抽样人员现场按样本头数随机确定各样品公驴。 A.1.2.4 全部取样 对已投产的每头公驴取样。 A.1.3 取样方法 对确定取样的公驴，从贮存冷冻精液的液氮容器中随机抽取不少于 25 剂的冻精。 A.1.4 样品的保存 存放冷冻精液的液氮容器质量应符合 GB/T 5458 的规定，使用前经过清洗后加入新鲜液氮，样品浸 在液氮中。取放样品时在空中暴露时间不得超过 10 s。由专人保管样品，样品不允许脱离液氮，抽样登 记单与样品随行。样品包装、标记应保持原样。 A.2 剂量检查 A.2.1 主要器材 小试管、剪刀、刻度吸管。 A.2.2 检查方法 取三支细管冷冻精液自然解冻后剪去两端，把精液倒入一小试管内，用 1.5mL 吸管准确吸取精液， 并读取总精液量。 A.2.3 计算 三支冻精的剂量平均数为样品的剂量，按式(A.1)计算： Q= （n1+n2+n3）/3 式中： Q——剂量值，单位为毫升(mL)； n1——第一支样品剂量，单位为毫升(mL)； n2——第二支样品剂量，单位为毫升(mL)； n3——第三支样品剂量，单位为毫升(mL)。 ………………………（A.1） 5 DB14/ T 1775—2019 A.3 精子活力检查 A.3.1 主要器材 显微镜或电视显微装置、恒温水浴箱、5.0 mL 试管、载玻片或精液性状板、盖玻片（18×18） 、显 微镜保温箱或恒温装置、滴管。 A.3.2 检查方法 三支细管分别直接置于 37℃水浴中解冻，取解冻三支混合后精液约 50 μL 置于载玻片上加盖玻片， 立即在载物台温度保持 38℃的情况下用 200 倍～400 倍显微镜观察活力，也可通过电视显微装置在荧光 屏上观察活力。每样片观察 3 个视野，并应观察不同液层内的精子运动状态，进行全面评定。 A.3.3 计算 三个视野活力评价值的平均数按式（A.2）计算： M＝（n1+n2+n3）/3 式中： M——活力 n1——第一视野活力； n2——第二视野活力； n3——第三视野活力。 ………………………（A.2） A.4 每剂量直线前进运动精子数检查 A.4.1 主要器材 血球计数板、血色素管、1 mL 吸管、小试管、计数器、显微镜或电视显微装置、滴管、3.0%氯化 钠溶液。 A.4.2 检查方法 细管精液用血色素管准确吸取 20 μL 解冻精液（也可使用第 A.2 章已检查后的样品）， 注入盛有 0.98 mL